Plasmide Double Nickase (h) Ly-GDI/RhoGDI2/ARHGDIB: sc-402326-NIC

ARHGDIB code pour Ly-GDI/RhoGDI2, un inhibiteur de dissociation du GDP des protéines Rho (RhoGDI) qui se lie aux GTPases prénilées de la famille Rho, telles que RAC1, RHOA et CDC42, afin de contrôler leur association à la membrane, leur cycle d’activation et leur trafic subcellulaire. En modulant la signalisation des GTPases Rho, Ly-GDI influence le remodelage du cytosquelette d’actine, l’adhérence et la migration cellulaires, le trafic vésiculaire ainsi que les fonctions des cellules immunitaires liées à la NADPH oxydase. L’activité d’ARHGDIB est donc étroitement liée à des voies qui régissent la chimiotaxie des leucocytes, la signalisation inflammatoire et les interactions avec les barrières. Une dérégulation du contrôle des GTPases Rho et de l’expression d’ARHGDIB a été associée à des modifications du comportement des cellules immunitaires et à des phénotypes pertinents pour la maladie dans des contextes de recherche en hématologie et en inflammation.

Ly-GDI/RhoGDI2/ARHGDIB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARHGDIB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARHGDIB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARHGDIB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARHGDIB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.