Particules Lentivirales d'Activation (h) Lsh: sc-402466-LAC

Le gène humain **HELLS** code la **hélicase spécifique des tissus lymphoïdes (Lsh)**, un remodelleur de la chromatine dépendant de l’ATP de la famille **SNF2** qui coopère avec les **DNA méthyltransférases** pour établir et maintenir les profils de **méthylation de l’ADN** ainsi que des états de chromatine répressifs. Lsh contribue à l’organisation de l’hétérochromatine, au silençage des transposons et à l’assemblage de la chromatine couplé à la réplication, reliant le remodelage des nucléosomes entraîné par l’ATP à la stabilité du génome et à l’hérédité épigénétique. Elle participe à des voies contrôlant la réparation de l’ADN, la progression du cycle cellulaire et des programmes transcriptionnels spécifiques de lignée via la régulation de l’accessibilité de la chromatine. Une activité HELLS dérégulée et une expression altérée de Lsh ont été associées à une instabilité de l’épigénome et à des programmes aberrants de silençage génique décrits dans de nombreux contextes tumoraux et dans des troubles du développement, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle épigénétique.

Les particules d'activation lentivirales Lsh (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HELLS dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Lsh (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HELLS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Lsh. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HELLS ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.