LRIG1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403210-ACT

LRIG1 (leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1) kodiert einen transmembranen Regulator der Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalübertragung, der die Menge und Aktivität von Rezeptoren wie Mitgliedern der EGFR/ERBB-Familie und MET moduliert. Über Effekte auf den Rezeptorumsatz sowie nachgeschaltete MAPK/ERK- und PI3K/AKT-Signalkaskaden trägt LRIG1 zur Kontrolle von Proliferation, Differenzierung und Gewebehomöostase bei. In vielen experimentellen Kontexten wird LRIG1 mit der Biologie epithelialer und neuraler Stamm-/Vorläuferzellen in Verbindung gebracht, wo es Nischensignale und die Begrenzung des Zellzyklus beeinflussen kann. Eine veränderte LRIG1-Expression wurde mit einer Fehlregulation von Wachstumsfaktor-Signalen in mehreren krankheitsrelevanten Modellen assoziiert, was seinen Einsatz als Knotenpunkt zur Untersuchung von Signalwegen unterstützt.

LRIG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LRIG1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LRIG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LRIG1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LRIG1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LRIG1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LRIG1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LRIG1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LRIG1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LRIG1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.