Partículas Lentivirales de Activación (h) LOC285636: sc-415435-LAC

C5orf51 codifica la proteína humana LOC285636, poco caracterizada, un factor regulador predicho con anotación funcional limitada y funciones dependientes de la expresión y del contexto que aún están por definirse. Asociaciones transcriptómicas emergentes sugieren que LOC285636 podría participar en redes de regulación génica que influyen en decisiones del estado celular, incluidos programas de proliferación y diferenciación, mediante la modulación de respuestas transcripcionales downstream. Se ha reportado una expresión alterada de C5orf51/LOC285636 en conjuntos de datos relevantes para determinadas enfermedades, lo que respalda su uso como locus candidato para estudios mecanísticos de respuesta al estrés, especificación de linaje y otros procesos celulares. Dado que su ubicación en vías aún no está completamente resuelta, la perturbación sistemática es valiosa para vincular LOC285636 con nodos de señalización y fenotipos en modelos celulares humanos.

Las partículas de activación lentiviral LOC285636 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de C5orf51 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral LOC285636 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción C5orf51, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de LOC285636. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo C5orf51 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.