Plasmide CRISPR/Cas9 KO LMX1B (h): sc-402945

Présentation

LMX1B code un facteur de transcription LIM-homeobox qui régule la spécification du destin cellulaire et l’organisation des tissus au cours du développement, avec des rôles majeurs dans l’identité dorsale des membres, la différenciation des podocytes et les programmes de sous-types neuronaux. Il contrôle l’expression génique en coordonnant des interactions via les domaines LIM avec des co‑régulateurs transcriptionnels et la liaison à l’ADN médiée par le domaine homéobox, influençant ainsi la morphogenèse, l’organisation de la matrice extracellulaire et l’architecture du cytosquelette. En biologie rénale, LMX1B contribue à l’intégrité de la barrière de filtration glomérulaire en modulant des réseaux géniques des podocytes, ce qui le relie à des voies qui gouvernent la structure du diaphragme de fente et la dynamique de l’actine. Des altérations génétiques de LMX1B sont associées au syndrome ongle‑rotule et à des phénotypes rénaux et squelettiques apparentés, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la régulation transcriptionnelle au cours du développement et de l’organogenèse.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LMX1B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LMX1B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LMX1B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LMX1B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LMX1B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LMX1B pour l'étude de la signalisation de LMX1B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LMX1B essentiels à la fonction de LMX1B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LMX1B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le LMX1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le LMX1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LMX1B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le LMX1B plasmide HDR (h) et le LMX1B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LMX1B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LMX1B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.