LIN-28B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402851-ACT

O gene humano LIN28B codifica a proteína ligante de RNA LIN-28B, um regulador heterocrônico que suprime a maturação da família de microRNAs let-7 e, assim, remodela programas de regulação gênica pós-transcricional que controlam proliferação, metabolismo e compromisso de linhagem. Ao modular redes dependentes de let-7, a LIN-28B influencia o tempo de desenvolvimento, estados celulares semelhantes aos de células-tronco e a reprogramação celular, interagindo com vias ligadas às saídas de sinalização de MYC, RAS/MAPK e mTOR. A atividade desregulada de LIN28B tem sido associada à diferenciação alterada e ao controle aberrante do crescimento em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo programas transcricionais oncogênicos e transtornos pediátricos do desenvolvimento. Essas propriedades fazem de LIN28B um nó útil para estudar a biogênese de miRNAs, o metabolismo de RNA e circuitos de regulação gênica em células humanas.

LIN-28B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LIN28B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LIN-28B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LIN28B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LIN28B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LIN-28B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LIN28B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LIN-28B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LIN-28B em células tumorais com expressão de LIN28B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.