LEPROTL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405575-ACT

LEPROTL1 (transcrito semelhante ao transcrito sobreposto ao receptor de leptina 1) codifica uma pequena proteína transmembranar implicada na regulação do tráfego de receptores e da triagem endossomal, influenciando a abundância e a competência de sinalização de receptores na superfície celular. Ao modular a internalização e a reciclagem, o LEPROTL1 pode moldar vias downstream ligadas à responsividade a fatores de crescimento e à sinalização por citocinas, com efeitos mais amplos sobre o metabolismo celular e o controle proliferativo. Alterações na expressão de LEPROTL1 foram relatadas em estudos de perfilagem molecular em contextos de doenças humanas, sustentando seu uso como um nó mecanístico para investigar a homeostase de receptores desregulada. Isso torna o LEPROTL1 relevante para estudos de turnover de proteínas de membrana, atenuação de sinal e reconfiguração de vias em estados associados a estresse e doença.

LEPROTL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LEPROTL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LEPROTL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LEPROTL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LEPROTL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LEPROTL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LEPROTL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LEPROTL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LEPROTL1 em células tumorais com expressão de LEPROTL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.