LARP1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404097-ACT

Humanes LARP1 (La-Ribonukleoprotein 1) ist ein RNA-bindendes Protein, das die Stabilität und Translation von mRNAs reguliert, mit ausgeprägten Effekten auf 5′TOP-mRNAs, die für ribosomale Proteine und Translationsfaktoren kodieren. Es wirkt an der Schnittstelle von mRNP-Remodeling und Ribosomenbiogenese und integriert Nährstoff- und Wachstumssignale über mTORC1-abhängige Signalwege, um die Kapazität der Proteinsynthese zu modulieren. Indem LARP1 die Translationsergebnisse und stressadaptive Genexpressionsprogramme formt, trägt es zur Kontrolle von Zellwachstum, Proliferation und metabolischer Homöostase bei. Eine fehlregulierte LARP1-Aktivität sowie veränderte mTOR-Translationsnetzwerke wurden in unterschiedlichen Krankheitskontexten beschrieben, was LARP1 als mechanistischen Knotenpunkt für die Untersuchung der Translationskontrolle und der Regulation des Zellwachstums unterstützt.

LARP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LARP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LARP1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LARP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LARP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LARP1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LARP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LARP1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LARP1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LARP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.