Plásmido CRISPR de Activación (h) Lamin B1: sc-400032-ACT

LMNB1 codifica la lámina B1, un componente principal de la lámina nuclear que sostiene la arquitectura del núcleo y ancla la heterocromatina periférica. La lámina B1 coordina la organización de la cromatina, la replicación y reparación del ADN, y la dinámica de la envoltura nuclear durante la mitosis, integrando señales mecánicas con programas transcripcionales. Mediante interacciones con dominios asociados a la lámina y complejos del poro nuclear, ayuda a regular la estabilidad del genoma y la progresión del ciclo celular. Alteraciones en la dosis de LMNB1 o en la integridad de la lámina nuclear se han vinculado con fenotipos neurodegenerativos y desmielinizantes, y se estudian con frecuencia en el contexto de laminopatías, defectos nucleares asociados al envejecimiento y la plasticidad de las células cancerosas.

Lamin B1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LMNB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Lamin B1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LMNB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LMNB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Lamin B1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LMNB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Lamin B1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Lamin B1 en células tumorales con expresión de LMNB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.