LAGE-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403565-ACT

CTAG2 codifica LAGE-1, un antigene cancro/testicolo con un’espressione altamente ristretta nei tessuti normali dell’adulto e una frequente ri-espressione in molteplici tipi di tumore. LAGE-1 è implicato in programmi trascrizionali associati al tumore e in stati cellulari legati alla proliferazione e al riconoscimento immunitario, ed è comunemente studiato insieme ad antigeni correlati, come i membri della famiglia MAGE, nel contesto della presentazione dell’antigene e dell’immunobiologia tumorale. Sebbene il suo ruolo meccanicistico preciso resti non completamente definito, l’espressione di CTAG2 è ampiamente utilizzata come biomarcatore dell’antigenicità tumorale e dello stato di linea cellulare, supportando la ricerca sulla riattivazione epigenetica, la segnalazione oncogenica e i fenotipi di evasione immunitaria. Un’espressione deregolata di CTAG2/LAGE-1 è stata riportata in diversi tipi di cancro, rendendolo rilevante per gli studi sull’eterogeneità tumorale e sulle pressioni selettive guidate dagli antigeni.

LAGE-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CTAG2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

LAGE-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CTAG2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CTAG2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di LAGE-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CTAG2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da LAGE-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via LAGE-1 nelle cellule tumorali con espressione di CTAG2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.