L-Selectin/CD62L/SELL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422872

Visão geral

Sell codifica a L-selectina (CD62L), um recetor de adesão leucocitária que medeia o homing de linfócitos e o “rolling” de leucócitos em vénulas de endotélio alto, através da ligação a addressinas de gânglio periférico e a outros ligandos glicânicos sulfatados e sialilados. Em células imunitárias de rato, o shedding e o tráfego do CD62L coordenam as transições entre fenótipos naïve, de memória central e ativados, ligando a dinâmica de adesão à migração orientada por quimiocinas e à vigilância imunitária. A sinalização de SELL e a clivagem do ectodomínio intersetam-se com cascatas inflamatórias e com a ativação endotelial, moldando o recrutamento de leucócitos durante lesão tecidular e infeção. Alterações no tráfego dependente de L-selectina são frequentemente estudadas em modelos de autoimunidade, inflamação crónica e imunologia tumoral, nos quais a localização celular e o priming influenciam os fenótipos da doença.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO L-Selectin/CD62L/SELL (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Sell em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Sell, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Sell na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína L-Selectin/CD62L/SELL.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Sell para a investigação da sinalização de L-Selectin/CD62L/SELL, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Sell críticos para a função L-Selectin/CD62L/SELL
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Sell para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo L-Selectin/CD62L/SELL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo L-Selectin/CD62L/SELL Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Sell. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo L-Selectin/CD62L/SELL Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR L-Selectin/CD62L/SELL (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Sell para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Sell definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.