KIAA2022 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415544-ACT

KIAA2022（X連鎖知的障害関連タンパク質KIAA2022としても知られる）は、脳で高発現する大型タンパク質をコードしており、神経発生およびシナプス機能に関与すると考えられています。分子パートナーはまだ完全には解明されていないものの、KIAA2022が神経突起伸長、樹状突起スパイン形態、そして神経回路の結合性を形作る活動依存的な転写プログラムの制御に関与することが報告されています。KIAA2022の遺伝子破壊や機能喪失変異は、X連鎖知的障害や自閉スペクトラム症に関連する特徴を含む神経発達表現型と関連づけられており、皮質回路形成や興奮性／抑制性バランスを制御する経路における重要性を支持しています。研究標的としてのKIAA2022は、ヒトiPSC由来ニューロンにおける遺伝子制御ネットワークの解析や、細胞骨格ダイナミクスとシナプス成熟を結びつける細胞過程の検証に有用です。

KIAA2022 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KIAA2022の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

KIAA2022 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KIAA2022 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKIAA2022転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性KIAA2022の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKIAA2022遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるKIAA2022依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKIAA2022発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるKIAA2022経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。