KCNQ2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402492-NIC

KCNQ2 kodiert eine spannungsabhängige Kaliumkanal‑Untereinheit, die sich zu neuronalen M‑Typ‑(Kv7-)Strömen zusammensetzt, das Ruhe мемbranpotenzial mitprägt und die Auslösung von Aktionspotenzialen reguliert. Durch die Kontrolle der unterschwelligen Erregbarkeit und der Spike‑Frequenz‑Adaptation ist KCNQ2 in Signalprozesse eingebunden, die die Dynamik des Membranpotenzials mit der Neurotransmission und der Stabilität neuronaler Netzwerke koppeln. Eine veränderte KCNQ2‑Funktion wurde mit neuroentwicklungsbezogenen und epilepsieassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch KCNQ2 ein zentrales Ziel für die Untersuchung von Mechanismen der Erregbarkeit und der Regulation synaptischer Schaltkreise in humanen Zellmodellen darstellt. Typische Forschungsanwendungen umfassen die Analyse der Biophysik von Ionenkanälen, Auswirkungen auf die neuronale Differenzierung sowie Veränderungen auf Signalweg‑Ebene in der aktivitätsabhängigen Genexpression.

KCNQ2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KCNQ2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KCNQ2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KCNQ2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KCNQ2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.