Junctophilin-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401805

Descripción general

JPH2 codifica la junctofilina-2, una proteína de anclaje de membrana que estabiliza complejos de membrana de unión entre la membrana plasmática/los túbulos T y el retículo sarcoplásmico en el músculo estriado. Al mantener el acoplamiento a escala nanométrica entre los canales de Ca²⁺ tipo L y los receptores de rianodina, la JUNCTOFILINA-2 favorece el acoplamiento excitación–contracción y una liberación intracelular eficiente de Ca²⁺. La función de JPH2 se interrelaciona con vías de manejo de Ca²⁺ que influyen en la contractilidad, la señalización eléctrica y programas de transcripción posteriores dependientes del calcio. La expresión u organización alteradas de JPH2 se han vinculado con la remodelación de los túbulos T en cardiomiocitos y con una homeostasis de Ca²⁺ desregulada, características asociadas a cardiomiopatías hereditarias y adquiridas y a fenotipos arritmogénicos en modelos experimentales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Junctophilin-2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen JPH2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del JPH2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de JPH2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Junctophilin-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en JPH2 para la investigación de la señalización de Junctophilin-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de JPH2 críticos para la función de Junctophilin-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de JPH2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Junctophilin-2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Junctophilin-2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus JPH2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Junctophilin-2 (h) y el plásmido HDR Junctophilin-2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología JPH2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana JPH2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.