Integrin α11/ITGA11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402541-ACT

ITGA11 codifica a integrina α11, uma subunidade α que se associa à β1 para formar um recetor de ligação ao colagénio, com papel destacado na adesão célula–matriz extracelular e na mecanotransdução. A integrina α11/β1 sustenta a remodelação do colagénio, a migração de fibroblastos e a organização do microambiente estromal, ligando o contacto com a matriz à dinâmica do citoesqueleto e a vias de sinalização como adesões focais/FAK, quinases da família SRC e as cascatas MAPK e PI3K-AKT a jusante. Por meio destes processos, o ITGA11 contribui para a remodelação tecidular e para respostas fibróticas, e a sua desregulação é estudada em contextos que incluem sinalização estromal alterada e comportamento celular invasivo. Assim, modular a expressão de ITGA11 é útil para investigar microambientes ricos em colagénio, sinalização dependente de adesão e plasticidade fenotípica induzida pela matriz.

Integrin α11/ITGA11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGA11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin α11/ITGA11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGA11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGA11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin α11/ITGA11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGA11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin α11/ITGA11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin α11/ITGA11 em células tumorais com expressão de ITGA11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.