Integrin α10/ITGA10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404080-ACT

ITGA10 codifica a integrina α10, uma subunidade α de ligação ao colágeno que normalmente se associa à integrina β1 para formar um recetor de adesão na superfície celular, enriquecido em linhagens mesenquimais, como os condrócitos. Ao ligar a matriz extracelular ao citoesqueleto de actina, a integrina α10 modula a montagem de adesões focais e vias de mecanotransdução envolvendo a sinalização FAK/SRC, cascatas MAPK a jusante e a dinâmica do citoesqueleto regulada por GTPases da família Rho. Estes processos influenciam a adesão celular, a migração e a remodelação da matriz extracelular, tornando o ITGA10 relevante para estudos de biologia da cartilagem, desenvolvimento esquelético e interações entre células estromais e a matriz. Alterações na adesão mediada por integrinas e na sinalização do colágeno também são frequentemente investigadas em contextos de fenótipos degenerativos das articulações e de comunicação cruzada tumor–estroma, onde o envolvimento com a matriz pode moldar programas de invasão ou de sobrevivência.

Integrin α10/ITGA10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGA10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin α10/ITGA10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGA10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGA10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin α10/ITGA10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGA10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin α10/ITGA10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin α10/ITGA10 em células tumorais com expressão de ITGA10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.