Integrin β1/ITGB1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400097-ACT

ITGB1 codifica a integrina β1, uma subunidade central que forma heterodímeros com múltiplas integrinas α para mediar a adesão célula–matriz extracelular e a sinalização bidirecional. A integrina β1 regula a montagem de adesões focais, o remodelamento do citoesqueleto de actina e a mecanotransdução por meio de vias que incluem FAK/SRC, PI3K–AKT e GTPases da família Rho, modulando a migração, a sobrevivência e a diferenciação celulares. Ao coordenar a sinalização dependente de adesão, o ITGB1 contribui para a organização tecidual, o reparo de feridas e o tráfego de células imunes. A expressão ou a sinalização desregulada de ITGB1 está associada a fenótipos alterados de invasividade e adesão na biologia do câncer, bem como a fibrose e patologias inflamatórias.

Integrin β1/ITGB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin β1/ITGB1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin β1/ITGB1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin β1/ITGB1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin β1/ITGB1 em células tumorais com expressão de ITGB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.