Integrin α1/ITGA1/CD49a Plasmide Double Nickase (m): sc-430957-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Integrin α1/ITGA1/CD49a Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Integrin α1/ITGA1/CD49a Double Nickase Plasmid (m) e il Integrin α1/ITGA1/CD49a Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Itga1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Integrin α1/ITGA1/CD49a Antibody (A-9): sc-271034
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Integrin α1/ITGA1/CD49a Plasmide Double Nickase (m) | sc-430957-NIC | 20 µg | $410.00 |
Itga1 codifica l’integrina α1 (ITGA1/CD49a), una subunità α che si associa alla β1 per formare il recettore del collagene/laminina α1β1, collegando l’interazione con la matrice extracellulare alla segnalazione intracellulare e al rimodellamento del citoscheletro. L’adesione mediata da ITGA1 regola migrazione e sopravvivenza cellulare, nonché la meccanotrasduzione, attraverso i complessi di adesione focale e vie a valle come FAK/Src, MAPK/ERK e PI3K/AKT, influenzando inoltre l’organizzazione tissutale e le interazioni tra cellule infiammatorie e matrice. Nei modelli murini, alterazioni della funzione di Itga1 sono state associate a un traffico leucocitario deregolato, al rimodellamento della matrice legato alla fibrosi e a cambiamenti dipendenti dal contesto nell’invasione delle cellule tumorali e nella biologia dello stroma. Questi ruoli rendono ITGA1 un bersaglio utile per studiare il riconoscimento della matrice extracellulare, la ritenzione delle cellule immunitarie e la segnalazione indotta dal collagene in microambienti rilevanti per lo sviluppo e la malattia.
Integrin α1/ITGA1/CD49a Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Itga1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Itga1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Itga1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Itga1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.