IL-2Rβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403250-ACT

IL2RB codifica a cadeia beta do recetor humano de interleucina‑2 (IL‑2Rβ; CD122), uma subunidade de sinalização partilhada pelos complexos recetores de IL‑2 e IL‑15, essencial para a ativação e a homeostase dos linfócitos. Após a ligação da citocina, a IL‑2Rβ coopera com IL2RG e IL2RA/IL15RA para iniciar cascatas de fosforilação dependentes de JAK1/JAK3 que ativam STAT5 e intersetam com as vias PI3K–AKT e MAPK. Esta sinalização coordena a proliferação, diferenciação e sobrevivência das células T, bem como o desenvolvimento e a função efetora das células NK. A atividade ou expressão desregulada de IL2RB pode perturbar a tolerância imunitária e as respostas citotóxicas, tornando-o um alvo amplamente utilizado em estudos mecanísticos da regulação imunitária e da biologia das doenças inflamatórias.

IL-2Rβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL2RB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-2Rβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL2RB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL2RB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-2Rβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL2RB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-2Rβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-2Rβ em células tumorais com expressão de IL2RB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.