IL-18Rβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411213-ACT

IL18RAP codifica a proteína acessória do recetor de IL-18 (IL-18Rβ), um correceptor que se associa ao IL18R1 para formar o complexo recetor funcional de IL-18 em células imunitárias e estromais. Após a ligação de IL-18, este heterodímero aciona sinalização dependente de MyD88 para ativar as cascatas IRAK/TRAF6, promovendo a ativação das vias NF-κB e MAPK e moldando programas inflamatórios com viés para IFN-γ. A atividade do IL-18Rβ contribui para a regulação do crosstalk entre a imunidade inata e adaptativa, incluindo respostas efetoras de células NK e T e a amplificação de redes de citocinas. Alterações na expressão ou na sinalização de IL18RAP têm sido associadas a patologia mediada pelo sistema imunitário e a contextos de doença inflamatória em que se implica desregulação da sinalização do eixo IL-18.

IL-18Rβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL18RAP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-18Rβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL18RAP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL18RAP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-18Rβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL18RAP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-18Rβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-18Rβ em células tumorais com expressão de IL18RAP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.