Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Hrs Double Nickase Plasmid (m): sc-420851-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Hrs Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Hrs Double-Nickase-Plasmid (m) und Hrs Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Hgs abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Hrs: sc-271455
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Hrs Double Nickase Plasmid (m) | sc-420851-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Hrs Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420851-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Hgs kodiert Hrs, eine zentrale Komponente des ESCRT-0-Komplexes, der ubiquitinierte Fracht erkennt und die endosomale Sortierung in Richtung multivesikulärer Körper (MVBs) und lysosomalen Abbaus einleitet. Hrs koordiniert die Herunterregulierung von Rezeptor-Tyrosinkinasen und die Beendigung der Signalübertragung, indem es die Endozytose mit Signalwegen wie EGFR/MAPK- und PI3K–AKT-Signaling verknüpft, und trägt zur Endosomenreifung sowie zum Membrantransport bei. Über seine Funktionen bei der Fracht-Clusterung und der Rekrutierung von ESCRT-Komponenten beeinflusst Hrs die Wechselwirkung zwischen Autophagie und Endolysosomen sowie die Proteostase. Eine fehlregulierte, Hrs-abhängige Trafficking-Maschinerie wurde mit veränderter Rezeptorsignalgebung sowie neurodegenerativen und onkogenen Prozessen in Verbindung gebracht, was Hgs zu einem geeigneten Knotenpunkt für mechanistische Studien zur endosomalen Signalübertragung und zum Proteinumsatz macht.
Hrs Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Hgs-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Hgs abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Hgs-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Hgs-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.