Plasmide Double Nickase (m2) HPRT: sc-420943-NIC-2

Le gène murin Hprt code l’hypoxanthine‑guanine phosphoribosyltransférase (HPRT), une enzyme clé de la voie de sauvetage des purines qui catalyse, à partir du PRPP, la conversion de l’hypoxanthine et de la guanine en IMP et GMP, contribuant ainsi au maintien de l’homéostasie des nucléotides et à la limitation du recours à la synthèse de novo des purines. L’activité d’HPRT influence la prolifération cellulaire et les réponses au stress métabolique via la régulation des pools de purines, et elle est couramment exploitée dans la sélection HAT et les essais de résistance à la 6‑thioguanine pour étudier la fonction de la voie de sauvetage et la mutagenèse. Une altération de la fonction d’HPRT est associée à une dérégulation du métabolisme des purines et ce locus est largement utilisé comme référence pour l’étude des réponses aux dommages de l’ADN, des effets de l’édition du génome et des contributions métaboliques à des phénotypes neurocomportementaux et hématopoïétiques dans des modèles murins. En tant que gène ubiquitaire lié au chromosome X, Hprt sert également de référence robuste pour la normalisation de l’expression et de marqueur de sélection/contre‑sélection dans les workflows d’ingénierie des cellules de mammifères.

HPRT Le plasmide double nickase (m2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Hprt dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Hprt. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Hprt. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Hprt.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.