Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) HPRT: sc-417332-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HPRT correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HPRT Double Nickase (h) et le plasmide HPRT Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HPRT1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HPRT Antibody (F-1): sc-376938
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HPRT | sc-417332-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HPRT | sc-417332-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HPRT1 code l’hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransférase (HPRT), une enzyme clé de la voie de récupération des purines, qui recycle l’hypoxanthine et la guanine en IMP et GMP, contribuant ainsi à l’homéostasie des nucléotides et au métabolisme énergétique. L’activité HPRT participe aux réponses cellulaires à l’épuisement des nucléotides et est au cœur des systèmes de sélection utilisant des analogues des purines dans les cellules en culture. La perturbation de HPRT1 dérègle les flux de purines et peut augmenter la production d’acide urique, reliant cette voie à des phénotypes de stress métabolique. Un déficit génétique en HPRT1 est classiquement associé aux troubles du spectre de Lesch–Nyhan et constitue un locus modèle largement utilisé pour étudier la mutation, la sélection et les conséquences en matière de réparation de l’ADN.
HPRT Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HPRT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HPRT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HPRT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HPRT1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.