HMG-I/HMG-Y Double Nickase Plasmid (h): sc-402396-NIC

HMGA1 kodiert die chromatinassoziierten architektonischen Proteine HMG-I und HMG-Y, die an AT-reiche DNA-Sequenzen binden, um die Organisation der Nukleosomen und die höherstufige Chromatinstruktur zu modulieren. Indem HMGA1 die Assembleierung von Enhanceosomen erleichtert und die DNA-Topologie verändert, beeinflusst es Transkriptionsprogramme, die den Zellzyklus, die Differenzierung und stressresponsive Signalwege steuern, einschließlich von Signalwegen, die mit der Regulation inflammatorischer Gene verknüpft sind. Eine dysregulierte HMGA1-Expression und veränderte Chromatinbelegung wurden in mehreren Krankheitskontexten mit veränderter Proliferation und Genomstabilität in Verbindung gebracht, was HMGA1 zu einem zentralen Knotenpunkt in Studien zur onkogenen Umprogrammierung von Transkriptionsnetzwerken macht. In menschlichen Zellen ist HMGA1 zudem an der Regulation des Replikationstimings und an DNA-Schadensantworten beteiligt – über seine Effekte auf die Zugänglichkeit des Chromatins.

HMG-I/HMG-Y Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HMGA1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HMGA1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HMGA1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HMGA1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.