HLA-DRβ5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402985-ACT

HLA-DRB5 kodiert die HLA-DRβ5-Kette, die sich mit HLA-DRA zu MHC‑Klasse‑II‑HLA‑DR-Heterodimeren zusammensetzt, welche extrazellulär stammende Peptide CD4+-T-Zellen präsentieren. Dieses Antigenpräsentationsprogramm ist zentral für die Aktivierung der adaptiven Immunantwort, die thymische Selektion und die periphere Immuntoleranz und wird durch den Class‑II‑Transaktivator (CIITA) sowie interferon‑γ‑responsive transkriptionelle Netzwerke reguliert. Die Expression von HLA-DRB5 ist am stärksten in professionellen antigenpräsentierenden Zellen ausgeprägt und kann während Entzündungen auch in anderen Zelltypen induziert werden, wodurch die T‑Zell‑Priming‑Prozesse und die Ergebnisse der Zytokinsignalgebung beeinflusst werden. Variationen in HLA‑Klasse‑II‑Haplotypen und eine dysregulierte MHC‑II‑Expression werden im Kontext von Autoimmunität, der Immunbiologie von Transplantationen und tumoralen Immunmikroumgebungen umfassend untersucht.

HLA-DRβ5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HLA-DRB5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HLA-DRβ5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HLA-DRB5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HLA-DRB5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HLA-DRβ5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HLA-DRB5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HLA-DRβ5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HLA-DRβ5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HLA-DRB5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.