Histone Deacetylase 6 (HDAC6) Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-420820-LAC

Hdac6 codifica a histona desacetilase 6 (HDAC6), uma desacetilase predominantemente citoplasmática que regula a acetilação de substratos não histónicos, incluindo a α-tubulina, a HSP90 e a cortactina, influenciando assim a dinâmica dos microtúbulos, a atividade de chaperonas e a remodelação da actina. Por meio dessas funções, a HDAC6 coordena processos-chave como a autofagia e a eliminação de proteínas mal dobradas mediada por aggresomas, o tráfego intracelular e a sinalização de resposta ao stress. A atividade da HDAC6 cruza-se com vias de proteostase que envolvem controlo de qualidade dependente de ubiquitina e pode modular a sinalização inflamatória e programas de motilidade celular. Redes desreguladas associadas à HDAC6 têm sido ligadas a modelos de neurodegeneração, fenótipos associados ao cancro e patologia mediada pelo sistema imunitário, sustentando a sua ampla utilidade em estudos mecanísticos.

As Partículas de Ativação Lentivirais Histone Deacetylase 6 (HDAC6) (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Hdac6 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Histone Deacetylase 6 (HDAC6) (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Hdac6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Histone Deacetylase 6 (HDAC6). A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Hdac6 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.