Plasmide CRISPR d'Activation (h) Histamine H1 Receptor: sc-401393-ACT

HRH1 code pour le récepteur humain de l’histamine H1, un récepteur couplé aux protéines G (GPCR) qui se couple principalement à Gq/11 pour activer la phospholipase Cβ, augmenter le Ca2+ intracellulaire et stimuler une signalisation dépendante de la PKC. Les voies en aval incluent les cascades MAPK/ERK et des programmes transcriptionnels qui régulent la perméabilité vasculaire, le tonus du muscle lisse et la communication neuro-immune. L’activité de HRH1 module le trafic des cellules inflammatoires et la production de cytokines, et a été associée à l’inflammation allergique, au prurit, à l’hyperréactivité des voies aériennes et à des phénotypes liés à la neurotransmission pertinents pour la régulation veille–sommeil. Dans des modèles cellulaires, HRH1 constitue un nœud accessible pour étudier la dynamique de la signalisation des GPCR, le couplage des seconds messagers et l’expression génique dépendante du stimulus.

Histamine H1 Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HRH1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histamine H1 Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HRH1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HRH1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histamine H1 Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HRH1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histamine H1 Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histamine H1 Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de HRH1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.