HIF1a Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400036-NIC

HIF1A codifica o fator induzível por hipóxia 1α (HIF1α), um fator de transcrição central no sensoriamento de oxigênio que se acumula em condições de baixo O₂ e ativa programas gênicos adaptativos que controlam a glicólise, a angiogênese, a eritropoiese e a sobrevivência celular. O HIF1α estabilizado forma um heterodímero com ARNT (HIF1β) e se liga a elementos de resposta à hipóxia para regular alvos como VEGFA, SLC2A1 e LDHA, integrando sinais das vias PI3K–AKT–mTOR, MAPK e de ROS mitocondriais. Em normóxia, a hidroxilação de prolina promove a ubiquitinação mediada por VHL e a degradação pelo proteassoma, acoplando a disponibilidade de oxigênio à saída transcricional. A atividade desregulada de HIF1A/HIF1α está implicada na biologia da hipóxia tumoral, em respostas ao estresse relacionadas à isquemia, na inflamação e na reprogramação metabólica, tornando-o amplamente utilizado em pesquisas de vias e modelos de doença.

HIF1a O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus HIF1A em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de HIF1A. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função HIF1A. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com HIF1A interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.