HES7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407096

Panoramica

HES7 (hairy and enhancer of split 7) codifica un repressore trascrizionale bHLH che funge da componente chiave dell’orologio di segmentazione durante lo sviluppo embrionale umano. Agisce a valle della segnalazione Notch e integra programmi di espressione genica oscillatoria che coordinano la somitogenesi, con una rigorosa regolazione della tempistica trascrizionale e delle dinamiche di feedback negativo. Un’attività alterata di HES7 compromette la formazione del pattern dei somiti ed è stata associata ad anomalie congenite della segmentazione vertebrale, risultando quindi rilevante per lo studio delle reti di regolazione genica nello sviluppo. Nei modelli cellulari, HES7 viene comunemente analizzato per i suoi ruoli nella repressione trascrizionale, nel crosstalk con la via di Notch e nei meccanismi di controllo dell’espressione ritmica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HES7 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HES7 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HES7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HES7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HES7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HES7 per lo studio della segnalazione di HES7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HES7 critici per la funzione di HES7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HES7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HES7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HES7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HES7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HES7 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HES7 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HES7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HES7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.