Plásmido CRISPR de Activación (h) HE4: sc-402876-ACT

WFDC2 codifica HE4 (proteína 4 del epidídimo humano), una glucoproteína secretada con dominio WAP (whey acidic protein) implicada en la regulación de proteasas extracelulares y en la remodelación del microambiente pericelular. La expresión de HE4 se asocia con programas de diferenciación epitelial y puede influir en las interacciones célula–célula, la adhesión y la proteostasis dentro de la vía secretora y del espacio extracelular. La desregulación de los niveles de WFDC2/HE4 se ha vinculado a alteraciones de la homeostasis tisular y a contextos de señalización inflamatoria en múltiples enfermedades derivadas de epitelio. Como proteína circulante y asociada a tumores en varios perfiles de expresión ligados a malignidad, HE4 se utiliza con frecuencia como lectura molecular de activación de vías y para la estratificación de fenotipos en investigación traslacional.

HE4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de WFDC2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HE4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus WFDC2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional WFDC2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HE4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo WFDC2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HE4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HE4 en células tumorales con expresión de WFDC2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.