Plásmido Doble Nickase (m) HAS2: sc-420798-NIC

Mouse Has2 codifica la hialuronano sintasa 2 (HAS2), una glicosiltransferasa asociada a la membrana que polimeriza hialuronano en la membrana plasmática y lo exporta a la matriz extracelular. La producción de hialuronano impulsada por HAS2 regula el ensamblaje de la matriz pericelular, la hidratación tisular y la señalización célula–matriz, lo que influye en la adhesión, la migración y la proliferación mediante vías que involucran a CD44 y RHAMM, así como la remodelación del citoesqueleto. La actividad de Has2 está estrechamente vinculada a la morfogénesis del desarrollo, la reparación de heridas, la señalización inflamatoria y la activación de fibroblastos, y las alteraciones de la homeostasis del hialuronano se han implicado en la fibrosis, la remodelación vascular y la biología del estroma asociada a tumores. Como determinante central de la mecánica de la matriz extracelular y de la disponibilidad de factores de crecimiento, Has2 se estudia con frecuencia en contextos de transición epitelio–mesénquima, angiogénesis y tráfico de células inmunitarias.

HAS2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Has2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Has2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Has2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Has2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.