HAS2 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-420798-NIC

O gene Has2 de camundongo codifica a hialuronano sintase 2 (HAS2), uma glicosiltransferase associada à membrana que polimeriza hialuronano na membrana plasmática e o exporta para a matriz extracelular. A produção de hialuronano mediada por HAS2 regula a montagem da matriz pericelular, a hidratação tecidual e a sinalização célula–matriz, influenciando adesão, migração e proliferação por vias que envolvem CD44 e RHAMM, bem como remodelamento do citoesqueleto. A atividade de Has2 está intimamente ligada à morfogênese do desenvolvimento, ao reparo de feridas, à sinalização inflamatória e à ativação de fibroblastos, sendo que alterações na homeostase do hialuronano estão implicadas em fibrose, remodelamento vascular e na biologia do estroma associado a tumores. Como determinante central da mecânica da matriz extracelular e da disponibilidade de fatores de crescimento, Has2 é frequentemente estudado em contextos de transição epitélio–mesênquima, angiogênese e tráfego de células imunes.

HAS2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Has2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Has2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Has2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Has2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.