HAPLN1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403874-ACT

HAPLN1 (Hyaluronan- und Proteoglykan-Link-Protein 1) ist ein Glykoprotein der extrazellulären Matrix, das Aggregate aus Hyaluronan mit Chondroitinsulfat-Proteoglykanen stabilisiert und damit die Matrixorganisation sowie die Gewebebiomechanik unterstützt. Am besten bekannt ist es für seine Funktionen in Knorpel- und Bindegeweben, wo es die Integrität der perizellulären Matrix mit aufrechterhält und Zelladhäsion, Migration und Mechanotransduktion beeinflusst. Die Funktion von HAPLN1 greift in Programme des ECM-Remodelings und in Signalwege ein, die auf die Matrixzusammensetzung reagieren, darunter integrin- und wachstumsfaktorabhängige Kaskaden. Eine dysregulierte HAPLN1-Expression und Matrixassemblierung wurden mit degenerativen und fibrotischen Prozessen in Verbindung gebracht und werden häufig in Studien zu Tumor-Stroma-Interaktionen und zum Remodeling metastatischer Nischen untersucht.

HAPLN1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HAPLN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HAPLN1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HAPLN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HAPLN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HAPLN1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HAPLN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HAPLN1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HAPLN1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HAPLN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.