Plásmido Doble Nickase (m) GTBP: sc-421718-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)GTBP consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GTBP (m) y el plásmido de doble nickasa GTBP (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Msh6. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GTBP Anticuerpo (E-8): sc-137015
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) GTBP | sc-421718-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) GTBP | sc-421718-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Msh6 de ratón codifica GTBP, un componente central del complejo MutSα de reconocimiento de desajustes junto con MSH2, que detecta desajustes base–base y bucles de inserción/deleción que surgen durante la replicación y la recombinación del ADN. Al iniciar la reparación de desajustes del ADN, GTBP ayuda a mantener la estabilidad del genoma, suprime la acumulación de mutaciones y se integra con procesos de reparación acoplados a la replicación y de señalización del daño. La alteración de Msh6 afecta la fidelidad de la reparación de desajustes, incrementa la inestabilidad de microsatélites y modifica las respuestas celulares al estrés replicativo. En investigación biomédica, Msh6/GTBP se utiliza ampliamente para estudiar mecanismos de mutagénesis y relaciones genotipo–fenotipo en vías de reparación del ADN asociadas al cáncer.
GTBP El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Msh6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Msh6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Msh6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Msh6 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.