G_{β 2} CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402936-ACT

GNB2 kodiert die humane G‑Protein‑Untereinheit Beta 2 (Gβ2), eine zentrale Komponente heterotrimerer G‑Proteine, die aktivierte G‑Protein‑gekoppelte Rezeptoren (GPCRs) mit intrazellulären Effektoren koppeln. In Partnerschaft mit Gγ‑Untereinheiten trägt Gβ2 zur Regulation von Signalausgängen bei, darunter die Aktivität der Adenylylcyclase, die Aktivierung der Phospholipase Cβ, die Modulation von Ionenkanälen sowie nachgeschaltete MAPK‑ und PI3K‑assoziierte Signalwege, die Zellproliferation, Migration und Neurotransmission prägen. Veränderte GPCR/G‑Protein‑Signalgebung unter Beteiligung von GNB2 wurde mit fehlregulierter Signaltransduktion in neurologischen und onkogenen Kontexten in Verbindung gebracht und ist damit für mechanistische Untersuchungen rezeptornaher Signalnetzwerke relevant. Als breit exprimiertes Signalgerüst wird Gβ2 häufig eingesetzt, um Signalweg‑Crosstalk und stimulusabhängige Transkriptionsprogramme zu untersuchen.

Gβ 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GNB2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Gβ 2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GNB2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GNB2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Gβ 2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GNB2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Gβ 2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Gβ 2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GNB2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.