GSH-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404282-ACT

GSX1 (também referido como GSH-1 em algumas anotações) codifica um fator de transcrição homeobox implicado na padronização do desenvolvimento inicial e na especificação de linhagens neuronais, por meio de ligação ao DNA específica de sequência e regulação transcricional. Em células humanas, os programas regulatórios associados ao GSX1 interagem com redes gênicas do neurodesenvolvimento que coordenam a proliferação de progenitores, a identidade regional e a diferenciação. A desregulação de circuitos transcricionais dirigidos por homeobox é frequentemente estudada no contexto de fenótipos neurodesenvolvimentais congênitos e de decisões alteradas de destino celular, tornando o GSX1 um nó útil para investigar o controle transcricional do comprometimento de linhagem. Como regulador nuclear, GSX1/GSH-1 é comumente avaliado por meio de perfilamento de expressão e ensaios baseados em cromatina para mapear alvos a jusante e o crosstalk entre vias.

GSH-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GSX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GSH-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GSX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GSX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GSH-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GSX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GSH-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GSH-1 em células tumorais com expressão de GSX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.