Plasmide CRISPR d'Activation (h) GRIP-1: sc-401800-ACT

NCOA2 code pour GRIP-1 (glucocorticoid receptor-interacting protein 1), un coactivateur des récepteurs nucléaires qui sert d’échafaudage à des complexes transcriptionnels et coordonne le remodelage de la chromatine afin de réguler l’expression des gènes sensibles aux hormones. GRIP-1 intègre les signaux provenant des récepteurs des stéroïdes et d’autres récepteurs nucléaires à des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, la différenciation, le métabolisme et les réponses inflammatoires. Il agit au sein d’assemblages de coactivateurs qui, en couplant la liaison du récepteur au recrutement d’histone acétyltransférases et de composants du médiateur, modulent l’activité des promoteurs et des enhancers. La dérégulation de la transcription dépendante de NCOA2 a été associée à des altérations de la signalisation endocrinienne et est impliquée dans des contextes de reprogrammation transcriptionnelle oncogénique ainsi que dans des pathologies du développement.

GRIP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NCOA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GRIP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NCOA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NCOA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GRIP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NCOA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GRIP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GRIP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de NCOA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.