GPR171 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412047-ACT

GPR171 codifica um receptor órfão da classe A acoplado à proteína G (GPCR), enriquecido no sistema nervoso central e implicado na sinalização neuromodulatória. Como GPCR, espera-se que se acople a proteínas G heterotriméricas para influenciar vias de segundos mensageiros, como a sinalização de cAMP/PKA e MAPK, moldando assim a excitabilidade neuronal e a transmissão sináptica. Associações descritas relacionam alterações na sinalização de GPR171 a fenótipos neurocomportamentais e a vias relevantes para recompensa, responsividade ao estresse e comportamento alimentar. Essas características tornam o GPR171 um alvo útil para estudar a regulação de GPCRs, o tráfego de receptores e programas transcricionais downstream em contextos neuronais e neuroendócrinos.

GPR171 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPR171 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR171 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPR171 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPR171, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR171. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPR171 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR171 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR171 em células tumorais com expressão de GPR171 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.