GPR107 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412891-ACT

GPR107 (receptor acoplado à proteína G 107) é uma proteína de membrana conservada, multipasse, que se localiza predominantemente na rede trans-Golgi e está implicada no tráfego de membranas intracelulares e na triagem de proteínas. Tem sido associada à regulação da dinâmica da via secretória e a processos de transporte retrógrado que influenciam a reciclagem de receptores e de cargas entre compartimentos endossomais e do Golgi. Por meio dessas funções, a GPR107 pode modular respostas celulares dependentes do transporte mediado por vesículas, incluindo o processamento de nutrientes e a disponibilidade de receptores na superfície celular. Alterações na expressão de GPR107 foram relatadas em múltiplos conjuntos de dados transcriptômicos relacionados ao câncer, o que sustenta seu uso como alvo mecanístico para o estudo de fenótipos dependentes de tráfego em modelos relevantes para doenças.

GPR107 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPR107 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR107 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPR107 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPR107, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR107. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPR107 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR107 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR107 em células tumorais com expressão de GPR107 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.