Glutathione Peroxidase 3/GPX3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402413-ACT

O GPX3 humano codifica a glutationa peroxidase 3, uma selenoproteína secretada que reduz o peróxido de hidrogênio e hidroperóxidos lipídicos usando glutationa, limitando assim o dano oxidativo extracelular. O GPX3 contribui para a homeostase redox, a modulação da sinalização inflamatória e a proteção de componentes de membrana e matriz contra espécies reativas de oxigênio, conectando-se a redes de resposta ao estresse oxidativo e ao metabolismo da glutationa. Alterações na expressão de GPX3 foram relatadas em contextos associados ao desequilíbrio redox, incluindo a biologia do câncer, o estresse metabólico e processos vasculares ou de remodelamento tecidual, nos quais a capacidade antioxidante extracelular pode influenciar a sinalização e as interações entre células e microambiente. Essas características tornam o GPX3 um alvo útil para o estudo de vias reguladas por redox, fenótipos de estresse oxidativo e a função antioxidante secretada em modelos celulares humanos.

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPX3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPX3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPX3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Glutathione Peroxidase 3/GPX3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPX3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Glutathione Peroxidase 3/GPX3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Glutathione Peroxidase 3/GPX3 em células tumorais com expressão de GPX3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.