Glutathione Peroxidase 2/GPX2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420663-ACT

O gene **Gpx2** de camundongo codifica a glutationa peroxidase 2 (GPX2), uma enzima antioxidante dependente de selênio que reduz o peróxido de hidrogênio e hidroperóxidos lipídicos usando glutationa, ajudando assim a preservar o equilíbrio redox e a integridade das membranas. A GPX2 é enriquecida em tecidos epiteliais e contribui para a desintoxicação de espécies reativas de oxigênio geradas durante o metabolismo, a inflamação e a exposição a xenobióticos. Por meio da modulação da sinalização de estresse oxidativo, a GPX2 pode influenciar vias ligadas à proliferação, diferenciação e respostas ao estresse, incluindo programas antioxidantes regulados por NRF2 e sinalização inflamatória. A expressão desregulada de GPX2 tem sido associada a alterações na homeostase epitelial e a fenótipos de dano oxidativo relevantes para estudos de inflamação, função de barreira e biologia tumoral em modelos murinos.

Glutathione Peroxidase 2/GPX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gpx2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Glutathione Peroxidase 2/GPX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gpx2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gpx2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Glutathione Peroxidase 2/GPX2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gpx2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Glutathione Peroxidase 2/GPX2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Glutathione Peroxidase 2/GPX2 em células tumorais com expressão de Gpx2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.