Plásmido CRISPR de Activación (h) GLTSCR1: sc-409913-ACT

GLTSCR1 (gen de la región candidata a supresor tumoral de glioma 1) codifica una proteína nuclear implicada en la regulación de la transcripción y en procesos asociados a la cromatina que influyen en el control del ciclo celular y en programas de diferenciación. Las interacciones descritas con la maquinaria transcripcional y epigenética sugieren un papel en la coordinación de estados de expresión génica y en el mantenimiento de la organización nuclear. La alteración de la expresión de GLTSCR1 o su disrupción genómica se ha asociado con loci relacionados con el cáncer, incluidas regiones relevantes para el glioma, lo que respalda su uso como un modulador dependiente del contexto de programas transcripcionales oncogénicos. En consecuencia, GLTSCR1 es de interés para estudiar el reajuste de vías en la señalización proliferativa, la regulación de la cromatina y las redes de expresión génica sensibles al estrés.

GLTSCR1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GLTSCR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GLTSCR1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GLTSCR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GLTSCR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GLTSCR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GLTSCR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GLTSCR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GLTSCR1 en células tumorales con expresión de GLTSCR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.