GHS-R1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401724-ACT

O GHSR codifica o receptor secretagogo do hormônio do crescimento GHS-R1, um GPCR (receptor acoplado à proteína G) de classe A responsivo à grelina, que regula a sinalização endócrina e neurometabólica. Após a ligação do ligante, o GHS-R1 acopla-se principalmente a Gq/11 para estimular a fosfolipase C, o turnover de fosfatos de inositol, a mobilização de Ca2+ intracelular e vias a jusante associadas a MAPK/ERK e PI3K, com crosstalk adicional mediado pelo arcabouço de β-arrestina. Esse receptor integra a detecção de nutrientes com a atividade do eixo hipotálamo–hipófise, influenciando a regulação do apetite, a liberação do hormônio do crescimento e a homeostase energética. Alterações na expressão ou na sinalização de GHSR têm sido implicadas em características relacionadas à obesidade, desregulação metabólica e fenótipos endócrinos, sustentando seu uso como alvo mecanístico em farmacologia de receptores e estudos de redes de sinalização.

GHS-R1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GHSR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GHS-R1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GHSR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GHSR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GHS-R1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GHSR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GHS-R1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GHS-R1 em células tumorais com expressão de GHSR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.