Plasmide CRISPR d'Activation (m) GHR: sc-420549-ACT

Le gène murin **Ghr** code le récepteur de l’hormone de croissance (GHR), un récepteur transmembranaire de cytokines qui se lie à l’hormone de croissance afin de réguler la croissance somatique, le métabolisme et l’homéostasie tissulaire. La liaison du ligand favorise la dimérisation du récepteur et l’activation de JAK2, déclenchant en aval la signalisation STAT5 ainsi que des interactions avec les voies PI3K–AKT et MAPK/ERK pour contrôler des programmes transcriptionnels impliqués dans la prolifération, la différenciation et l’utilisation des nutriments. L’activité de GHR module la production hépatique d’IGF‑1 et influence la physiologie du tissu adipeux, du muscle et de l’os, ce qui en fait un élément central de la régulation endocrinienne de la croissance et de l’équilibre énergétique. Une signalisation GHR dérégulée a été associée à des phénotypes de croissance altérés et à des dysfonctionnements métaboliques, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes de biologie du développement, de vieillissement et de remodelage des voies endocrines.

GHR Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ghr sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GHR Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ghr dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ghr, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GHR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ghr natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GHR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GHR dans les cellules tumorales présentant une expression de Ghr silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.