GDF-15 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401430-NIC

O fator de diferenciação de crescimento 15 (GDF15; GDF-15) é uma citocina secretada, responsiva ao estresse, da superfamília TGF-β, cuja expressão aumenta em resposta à disfunção mitocondrial, a sinais inflamatórios e a danos celulares. Ele modula o balanço energético sistêmico e a adaptação dos tecidos ao estresse, sendo frequentemente utilizado como um marcador de respostas integradas ao estresse que envolvem vias como a sinalização de p53, a inflamação mediada por NF-κB e programas transcricionais ligados a SMAD. Na biologia humana, alterações na expressão de GDF-15 estão associadas a remodelamento cardiometabólico, inflamação crônica e interações tumor–hospedeiro, refletindo papéis na regulação imune, no metabolismo e na sobrevivência celular. A perturbação experimental de GDF15 sustenta estudos mecanísticos de sinalização de estresse, de comunicação cruzada entre citocinas e de efeitos dependentes do contexto sobre proliferação e apoptose.

GDF-15 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GDF15 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GDF15. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GDF15. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GDF15 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.