GATAD1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403468-ACT

GATAD1 (GATA zinc finger domain containing 1) codifica una proteina nucleare legante il DNA, implicata nel controllo trascrizionale associato alla cromatina attraverso il suo dominio a dita di zinco e l’interazione con complessi regolatori. Modulando l’attività di promotori ed enhancer, GATAD1 può influenzare programmi di espressione genica legati alla progressione del ciclo cellulare, alla differenziazione cellulare e alla segnalazione responsiva allo stress. Un’alterata espressione o perturbazioni genetiche di GATAD1 sono state riportate in diversi contesti tumorali, a supporto dell’interesse a indagarne il ruolo nelle reti trascrizionali oncogeniche e nella disregolazione epigenetica. Ciò rende GATAD1 un bersaglio utile per studiare come i regolatori della cromatina plasmino vie a valle che incidono su proliferazione e stabilità del genoma.

GATAD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GATAD1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GATAD1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GATAD1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GATAD1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GATAD1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GATAD1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GATAD1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GATAD1 nelle cellule tumorali con espressione di GATAD1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.