GALK1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405217-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GALK1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase GALK1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase GALK1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GALK1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GALK1 Anticorpo (A-2): sc-393404
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GALK1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-405217-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GALK1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-405217-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GALK1 codifica a galactoquinase 1, a enzima dependente de ATP que catalisa a fosforilação de α-D-galactose em galactose-1-fosfato na primeira etapa comprometida da via de Leloir. Essa reação sustenta o fluxo de carboidratos para a produção de UDP-galactose, influenciando a capacidade de glicosilação e uma homeostase celular mais ampla de energia e de açúcares de nucleotídeos. Alterações na atividade de GALK1 perturbam a utilização de galactose e o equilíbrio de metabólitos, o que é relevante para o estudo de erros inatos do metabolismo da galactose e de efeitos a jusante nas respostas celulares ao estresse. Como enzima metabólica citosólica, a GALK1 oferece um ponto acessível para investigar a regulação dependente de nutrientes e a comunicação entre vias (crosstalk) com a glicólise e a biossíntese de glicanos.
GALK1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GALK1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GALK1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GALK1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GALK1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.