Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GALK1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405217
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- GALK1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico GALK1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GALK1 Anticuerpo (A-2): sc-393404
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
GALK1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-405217 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
GALK1 codifica la galactocinasa 1, una enzima citosólica que cataliza la fosforilación de la α-D-galactosa a galactosa-1-fosfato, iniciando el flujo a través de la vía de Leloir para el aprovechamiento de la galactosa. Al controlar la entrada de la galactosa en rutas de la glucólisis y de biosíntesis de glicoconjugados, la actividad de GALK1 contribuye al metabolismo energético celular y a la homeostasis de los glicanos. La alteración del manejo de la galactosa se asocia con errores congénitos del metabolismo, y los cambios en la función de la vía de Leloir pueden influir en las respuestas al estrés oxidativo y en la toxicidad de metabolitos en diversos contextos celulares. Por ello, GALK1 es relevante para estudiar el metabolismo de carbohidratos, la reprogramación metabólica y los efectos posteriores sobre la glicosilación de proteínas y lípidos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO GALK1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GALK1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GALK1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GALK1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GALK1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GALK1 para la investigación de la señalización de GALK1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de GALK1 críticos para la función de GALK1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GALK1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido GALK1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GALK1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GALK1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GALK1 (h) y el plásmido HDR GALK1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GALK1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GALK1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.