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galectin-9CRISPR激活质粒(m) | sc-421420-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
galectin-9CRISPR激活质粒(m2) | sc-421420-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
小鼠 Lgals9 基因编码半乳糖凝集素-9(galectin-9),这是一种可结合 β-半乳糖苷的凝集素,可通过对细胞表面及细胞外基质糖缀合物的糖链依赖性识别,调控细胞-细胞与细胞-基质相互作用。Galectin-9 通过调节白细胞激活、细胞因子程序以及组织内迁移/归巢,参与免疫信号传导与炎症调控,并对与免疫检查点生物学及应激反应性转录相关的通路产生下游影响。它还会影响黏附、迁移与凋亡等过程,而这些过程共同塑造肿瘤-免疫互作动态及慢性炎症微环境。LGALS9/galectin-9 表达失衡与自身免疫、感染性疾病的免疫病理以及肿瘤生物学相关,因此可作为免疫学与微环境研究中的关键机制节点。
galectin-9 CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Lgals9的表达。
galectin-9 CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Lgals9基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Lgals9转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性galectin-9表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Lgals9位点,并能够研究内源性位点上依赖于galectin-9的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Lgals9表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟galectin-9通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。