G530011O06Rik Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-437289-LAC

O gene murino G530011O06Rik codifica uma proteína em grande parte não caracterizada, com anotação funcional limitada, sendo frequentemente estudado em esforços de transcriptômica e biologia de sistemas para identificar novos reguladores do estado celular. Dados de expressão disponíveis sugerem regulação dependente do contexto, o que pode refletir papéis em processos básicos como controle transcricional, metabolismo de RNA ou redes gênicas associadas à sinalização. Como a posição do gene em vias biológicas permanece incompletamente definida, estudos baseados em perturbação são frequentemente utilizados para mapear programas transcricionais a jusante e vias de interação. Padrões de expressão alterados de genes RIKEN pouco caracterizados, como o G530011O06Rik, são comumente investigados como biomarcadores ou moduladores em modelos relevantes para doenças, incluindo inflamação, estresse metabólico e fenótipos neurobiológicos, sem implicar causalidade.

As Partículas de Ativação Lentivirais G530011O06Rik (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de G530011O06Rik numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais G530011O06Rik (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição G530011O06Rik, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de G530011O06Rik. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo G530011O06Rik e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.