G3BP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403630-ACT

A G3BP2 humano (fator de montagem de grânulos de estresse G3BP 2) é uma proteína ligante de RNA que atua como um nucleador central dos grânulos de estresse citoplasmáticos, integrando a sinalização e o metabolismo de mRNA durante o estresse celular. Ela participa do controle da tradução, da estabilização/degradação de mRNA e de respostas inatas ao estresse por meio de interações que influenciam a dinâmica de complexos ribonucleoproteicos e vias ligadas a quinases ativadas por estresse. O G3BP2 também sustenta uma regulação pós-transcricional mais ampla ao coordenar montagens de RNA-proteína que afetam a sobrevivência celular e a adaptação a sinais ambientais. A desregulação da expressão de G3BP2 e da biologia dos grânulos de estresse tem sido associada a fenótipos relacionados ao câncer e a perturbações de proteostase relevantes para neurodegeneração, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de grânulos de RNA.

G3BP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de G3BP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

G3BP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus G3BP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição G3BP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de G3BP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus G3BP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de G3BP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via G3BP2 em células tumorais com expressão de G3BP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.